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Elisa實驗:從洗板到結果判讀指南

更新時間:2025-10-29    點擊次數(shù):148

  Elisa實驗:從洗板到結果判讀指南

  1. ?洗板操作要點?

  洗滌液配制?:使用含0.05% Tween-20的緩沖液,確保pH中性?。

  洗滌方法?:每孔注滿洗滌液后靜置1分鐘,重復3-5次,最后拍干孔內殘留液體?。

  常見問題?:洗滌不津會導致高背景,過度洗滌可能降低信號強度?。

  2. ?顯色與終止反應?

  顯色控制?:TMB底物避光孵育10-15分鐘,顯色梯度需肉眼可見(標準品孔由淺至深)?。

  終止時機?:顯色過深(如最高濃度孔OD>2.0)需提前終止,避免非線性響應?。

  3. ?標準曲線與結果判讀?

  曲線擬合?:優(yōu)先選擇四參數(shù)邏輯(4-PL)擬合,要求R2>0.99?。

  濃度計算?:樣本OD值需落在標準曲線范圍內,超出時需稀釋重測?。

  質控標準?:

  復孔CV<15%?;

  質控品回收率80%-120%?;

  樣本稀釋線性驗證(回收率80%-120%)?。

  4. ?常見異常處理?

  高背景?:優(yōu)化封閉條件(如延長封閉時間至2小時)或降低抗體濃度?。

  無顯色?:檢查試劑有效期、酶標物活性及操作步驟完整性?。

  曲線異常?:驗證標準品稀釋準確性及移液器精度?。

  5. ?結果表達方式?

  定性判定?:S/Co值≥1為陽性(S=樣本OD值,Co=cut-off值)。

  半定量?:通過抑制率(競爭法)或滴度(間接法)表示。

  注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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