實(shí)驗(yàn)耗材—酶標(biāo)板的分類及選擇

　　酶標(biāo)板作為載體的固相聚苯乙烯表面對抗原、抗體或抗原抗體符合物的吸附起到很重要的作用。在常用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中，參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時(shí)間等條件起著關(guān)鍵作用。

　　酶標(biāo)板的分類：

　　1、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔，其中96孔是現(xiàn)在的，因?yàn)槊笜?biāo)板就是配合酶標(biāo)儀用，現(xiàn)在的酶標(biāo)儀做出來的最多的是96孔，所以客戶在購買時(shí)也是要96孔板，廠家也為了適應(yīng)市場基本上做出來的就是96孔的。

　　2、根據(jù)顏色又分為透明、黑色、白色。透明的是的，用于最一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)。相對于透明的的板子，還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子，一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板自身會有光吸收，所以它的信號相對于白色的板子要低很多，因此一般用于檢測較強(qiáng)的光，如熒光檢測。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測，常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標(biāo)板還可以消弱非特異反應(yīng)帶來的問題。有些客戶會問，用一般的酶標(biāo)板可不可以進(jìn)行發(fā)光檢測，回答是不可以的，因?yàn)橐话銖幕瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性的，也就是說各個(gè)方向上同等發(fā)射出來的。如果用透明的板子，光不僅會從垂直方向發(fā)散，還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會通過各個(gè)孔之間的間隙和孔壁。這樣的話，光較強(qiáng)時(shí)相鄰孔之間的影響就會很大，因此不能用透明的酶標(biāo)板來進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)。

　　3、高結(jié)合力酶標(biāo)板：本生生物酶標(biāo)板經(jīng)表面處理后蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng)，可達(dá)300~400ngIgG/cm2，主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性，并可相對減少包被蛋白的濃度和用量，不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。抗原或抗體包被后，以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位，需使用蛋白作為封閉劑。

　　4、中結(jié)合力酶標(biāo)板：酶標(biāo)板經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結(jié)合，適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體，其蛋白結(jié)合能力為200~300ngIgG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性，適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體，可降低潛在的特異性交叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

　　5、氨基化酶標(biāo)板：本生生物酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基，其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值，其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性，一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外，其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性，使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。

　　酶標(biāo)板的選擇：

　　根據(jù)底部不同，酶標(biāo)板可分為平底、U型底平底、V型底三類。平底：底部讀數(shù)平板與細(xì)胞培養(yǎng)用，折光率較低，適合用于上酶標(biāo)儀讀數(shù)。U型底：折光率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作, 也適用于不需上機(jī)讀數(shù)、直接通過目測顏色深淺，可用于凝集。V型底：精確吸取樣品和儲存樣品。